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采用性状鉴定、显微鉴定对穿心藤进行观察
时间:2017-06-25
穿心藤主要别名九十九窿 ,系雷公藤属植物穿心藤 Amydrium hainanense （Ting et T. L. Wu ex H. Li） H. Li.的全株。
本品为广西瑶药常用108种经典老班药中的"穿心风",具有清热解毒、祛风除湿之功效，民间用于胃炎、胆囊炎骨结核、疥疮、蜂窝组织炎等[1-3].穿心藤含有齐墩果酸、熊果酸、大黄素等成分[4],现对穿心藤进行质量标准研究，实验结果如下。
1 仪器与材料。
1.1 仪器：高效液相色谱仪苏州岛津LC-10A;万能视频成像装置LY~HPCCD;水浴锅；烘箱；马弗炉；万分之一电子天平。
1.2 材料：穿心藤样品：091115（荔浦）、091223（金秀）、091230（金秀）、100930（贺州）、110418（金秀）、120331（金秀）由本院自采，均由本院中药所鉴定。熊果酸对照品，中检所，20mg/支，批号110742-200519.
2 性状鉴别。
本品茎圆柱形，直径0.3~1.5cm,表面灰黑色，有纵皱纹，有的有须根，体轻易折断，断面皮部常粘连，纤维性强，中柱灰褐色。
叶纸革质，卵状披针形，顶端渐尖，全缘，长5~25cm,宽3~11cm,基部截斜，上下表面灰黄色。气微，味淡。
3 显微鉴别。
3.1 茎横切面：表皮细胞1列，方圆形。皮层细胞数列，细胞类圆形，散有叶迹维管束，外韧形，韧皮部外有3~9列纤维。内皮层明显，在内皮层处有石细胞1~3列排列成环，直径39~59 μm,石细胞周围的薄壁细胞中有的含草酸钙方晶，直径20~31μm,中柱维管束多个散在分布，外韧型，韧皮部外有2~5列纤维，木质部导管1~2,径约18~117 μm.
3.2 粉末鉴别：灰绿色。韧皮纤维淡黄色，成束或分离，先端钝尖或平截，胞腔大小不一，直径16~31μm,壁厚约5μm.木纤维壁较光滑，先端渐尖，胞腔平滑，壁厚约4μm.叶下表皮细胞壁较平直，气孔不定式。草酸钙方晶散在或存在于薄壁细胞中，直径8~26μm;草酸钙簇晶少见，直径13~21μm.导管淡黄色，螺纹或具缘纹孔导管，直径19~73μm.木薄壁细胞长方形，纹孔棱形或一字形。
4 熊果酸含量测定。
4.1 色谱条件：Wondasil -C18柱（4.6mm×250mm,5μm）；以甲醇-0.2%冰醋酸（86:14）为流动相；进样量10μl,流速1.0ml/min,检测波长210nm.
4.2 供试品配制：取本品粉末1.0g（过60目筛），精密称定，置锥形瓶中，精密加入甲醇25ml,称定重量，加热回流60分钟，放至室温，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，弃去初滤液，取续滤液，用微孔滤膜过滤，即得。
4.3 标准曲线考察：本研究得标准曲线为Y=18666X+52863,r=0.9992,在20.6~329.6μg·mL-1范围内，熊果酸浓度与其峰面积呈正比关系。
4.4 精密度的考察 :取按 4 . 2 方法制备的同一样品溶液（120331），照 4.1 方法分别连续测定峰面积 6 次，计算，结果测得样品溶液中熊果酸峰面积的RSD 值为 1.32%,说明本法的精密度良好。
4.5 稳定性的考察：取同一样品（120331），按4.2方法制备，于制备后0h、4h、8h、12h、16h,按照4.1分别测定其峰面积，计算峰面积RSD值为1.92%,说明样品溶液在16h内保持稳定。
4.6 重复性的考察：取同一批样品（120331），按4.2方法制备6份样品溶液，照4.1方法分别测定其峰面积，计算。结果测得熊果酸含量为2.33mg·g-1生药材，RSD值为0.88%,说明本方法重复性好。
4.7 准确度的考察：精密称取已知含量（2.33mg·g-1）的供试品（120331）粉末约 0.5g6 份，分别置 6 个具塞锥形瓶中，精密加入 412μg·mL-1熊果酸对照品溶液 2.8ml,精密加入甲醇 23.2ml,按 4.2 的方法提取，按照 4.1 测定，计算加样回收率，结果见表 1,熊果酸平均回收率为 99.6%,RSD=1.01%（n=6）。
4.8 按供试液的制备及检测方法，测定6批穿心藤药材中熊果酸的含量（%）分别为0.17、0.18、0.15、0.21、0.11、0.23.
5 检 查。
5.1 水分：参考中国药典2010年版（附录Ⅸ H第一法 烘干法）测定，6批样品水分（%）分别为10.0、11.5、11.3、10.5、11.5、12.2,因此，将本品水分拟订为不得过15.0%.
5.2 总灰分：参考中国药典2010年版（附录Ⅸ K灰分测定法）测定，6批样品总灰分（%）分别为5.24、7.07、6.99、6.55、8.13、7.36,因此，将本品总灰分拟定为不得过9.0%.
5.3 浸出物：以水溶性浸出物测定法项下的热浸法（中国药典2010年版附录附录X A）测定，本品6批浸出物（%）分别为19.6、20.1、22.8、20.0、21.3、17.2.将本品浸出物含量拟订为不少于15.0%.
6 讨 论。
笔者采用HPLC法对穿心藤所含成分进行初步摸索，齐墩果酸、大黄素成分含量甚微，只有熊果酸含量较高，摸索穿心藤中熊果酸的含量测定方法，可作为控制本品质量标准的指标之一。用紫外-可见分光光度计在200~400nm进行扫描，熊果酸对照品在206.4nm波长处有最大吸收，考虑到末端吸收的影响，故最后选定检测波长为210nm.
本实验建立了穿心藤主要性状鉴别及显微鉴别；建立了穿心藤中熊果酸的含量测定方法并进行验证；制定了穿心藤药材相应的水分、总灰分、浸出物限度。以上质量标准研究结果，为穿心藤药材质量评估、监管等方面提供技术支持。
参考文献：
[1] 中国科学院中国植物志编辑委员会。中国植物志第13卷第2分册[M].北京：科学出版社，1979:24-26.
[2] 覃迅云，罗金裕，高志刚。中国瑶药学[M].北京：民族出版社，2002:684-685.
[3]戴斌。中国现代瑶药[M].南宁：广西科学技术出版社，2009:244-245.
[4] 黄艳，李星宇，刘元，等。瑶药穿心藤的化学成分研究[J].中国实验方剂学杂志，2014,29（3）：46-48.
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