安胎中药复方的毒理性分析

时间:2017-06-25

中药治疗妇产科疾病有着悠久历史与确切疗效，《神农本草经》明确指出治疗妇产科药物达五十余种，首载桑寄生、白胶、阿胶、黑雌鸡为安胎药； 《金匮要略》所列 "妇人妊娠病"和 "妇人杂病",是中国历史上最早详细论述妇产科疾病的专门篇章[1],并记载了胶艾汤、当归散、当归芍药散、白术散安胎名方； 宋朝妇产科有所发展，妇产科成为独立的一科，并诞生了两部系统的妇产科专著，《十产论》与 《妇人大全良方》； 再之后各医家对妇产科均有所论述[2].中医药源远流长，经长期临床筛选，仍有不少方药沿用至今。

　　宜春地方老中医长期治疗妇产科疾病，对于中药治疗胎动不安、胎漏和滑胎有着丰富经验，观其辨证组方，多为此安胎中药复方基础上加减化裁，常有显著疗效。然而，中药复方可能存在一定的毒性，为了明确其毒性大小，对实验动物肝脏、肾脏与生殖系统的影响，进行复方的急性和长期毒性的实验研究。结果表明，在中等剂量持续给药后，对实验小鼠肝脏、肾脏和生殖系统未见明显影响。

　　1 材料与方法。

　　1. 1 材料。

　　动物： 昆明种健康小鼠 80 只，全部雌性，体重 18 -22g,实验小鼠维持饲料，由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供。

　　药物： 安胎中药复方，由宜春市名老中医提供。西党参 15g,白术 9g,黄芪 12g,当归 15g,白芍 10g,桑寄生 15g,熟地 10g,砂仁 3g,菟丝子 15g.

　　1. 2 试验准备。

　　1. 2. 1 药物制备。

　　将安胎中药复方粉碎机中粉碎，称取 100g 药物粉末，用 600mL 自来水煎煮两次，滤去药渣后，将两次的中药汤液混合离心机离心3000rmp 10min,再取上清液低压旋蒸至 50mL,待用，此时药液浓度为 2g/mL.

　　1. 2. 2 动物准备。

　　实验前适应性喂养小鼠一周，动物房室内温度26℃ ,普通饲料喂养，饮用水为无菌水。

　　1. 3 试验方法。

　　1. 3. 1 急性毒理实验。

　　1. 3. 1. 1 预试验取雌性小鼠 16 只，禁食不禁水处理 12h,随机分为四组剂量用药，欲测出 1/4、2/4、3/4、4/4 致 死 量， 灌 胃 量 0. 4mL /10g, 最 大 药 物 浓 度1. 43g / mL,灌胃一次，期间连续观察 7d,小鼠生命状态与死亡情况，按照半数致死量 （LD50） 实验方法[3]检测该药对小鼠的半数致死量 （LD50） ,最大耐受量 （MTD） .

　　1. 3. 1. 2 急性毒理试验将小鼠随机分为 3 组，高剂量 （57. 2g/kg）组，低剂量 （28. 6g/kg） 组，空白组。将药物稀释至需要浓度，各组小鼠在灌胃前禁食不禁水处理12h,灌胃量 0. 4mL /10g.给药 1 次，正常饲养持续观察 7d,观察并详细记录小鼠的状态，记录每天的体重。一周后将所有小鼠用颈椎脱臼法处死，解剖观察小鼠的肝、肾、子宫及其附件的变化。

　　1. 3. 2 长期毒性实验。

　　（1） 称量安胎中药复方药物100g 于2000mL 的烧杯中，加蒸馏水1000mL,水浴煮沸30min,四层纱布过滤取其滤液，旋蒸至50mL 于离心管中，待用。

　　（2） 随机将60 只小鼠作为大剂量组、小剂量组和对照组，每一组20 只，并将每组的每只小鼠编号。

　　（3） 大剂量组小鼠按0.02mL/g 的复方中药剂量灌胃，小剂量组的小鼠按0.01mL/g 的药物剂量灌胃，对照组小鼠按0.01mL/g 的蒸馏水剂量灌胃。

　　（4） 复方中药按照以上各组剂量喂食给药30d,实验周期 60d,每天称体重和食量，记录数据，连续观察 14 天后处死解剖，称量肝重和肾重。

　　3 结果与分析。

　　3. 1 急性毒性实验结果。

　　3. 1. 1 各处理组和对照组的体重变化各组小鼠体重以 g 为单位，对照组与低剂量组、高剂量组的平均体重，在灌胃前与灌胃后 3d均无统计学差异，但在灌胃后 7d 出现统计学差异。

　　3. 1. 2 复方中药的耐受量随机分为四组剂量用药，检测 1/4、2/4、3/4、4 /4 致死量，灌胃量 0. 2mL /10g,最大药物浓度 2g/mL,连续观察 7d,实验期间各处理组小鼠生命状态良好，实验过程中各组小鼠均无死亡现象，无法测出 LD50,测得小鼠对该药的最大耐受量 （MTD） 为 40g/kg,此测得剂量约为临床常用剂量的 25 倍。

　　3. 2 长期毒性实验结果。

　　3. 2. 1 各处理组和对照组的体重、肝脏、肾脏重量比较长期毒性实验周期结束时处死、解剖全部小鼠，各组小鼠平均体重有小的变化但无统计学意义，对照组、低剂量组、高剂量组的肝脏重量依次增大，表现最明显的是肾脏重量依次显著增大。

　　称量肝脏体重量、肾脏体重量，计算肝、肾与小鼠体重的比重如表 2 所示，给药组与对照组的差异无统计学意义。

　　3. 2. 2 各试验组的肝脏组织检查结果肉眼观察解剖小鼠的胃、肝脏、肾脏、卵巢、输卵管和子宫，并将给药组与空白对照组进行组织解剖比较，未见显著差异，无肿胀、萎缩、出血和粘连等病理改变。显微镜观察，对照组小鼠肝小叶结构清晰，中央静脉、肝细胞索、肝血窦及汇管区清晰，肝细胞排列整齐，胞浆丰富红染，细胞核圆形； 各器官未见炎症、变形性坏死。处理组 30 倍剂量给药组小鼠肝组织细胞与对照组基本无差异，表明复方安胎中药在中等剂量的情况下，对小鼠的肝脏无毒性。高剂量组可见肝细胞严重水肿，胞浆疏松淡染，部分 （25%） 出现肝小叶模糊、中央静脉扩张； 60 倍高剂量处理组给药与对照组比较，小鼠肝组织细胞出现明显的影响，在大剂量持续给药时，对小鼠肝脏有一定的损伤。
 

　　（A - B） 小鼠肝组织空白对照 （左，100x,右，400x）（C - D） 30 倍中药剂量处理后肝组织 （左，100x,右，400x）（E - F） 60 倍中药剂量处理后肝组织 （左，100x,右，400x）3. 2. 3 各处理试验组的小鼠肾组织解剖结果对照组肾小球、肾小管、集合管和肾乳头结构清晰。而 30 倍剂量给药处理组小鼠肾组织细胞与对照组基本无差异，表明复方安胎中药在中等剂量给药时，对小鼠肾脏无毒性。60 倍高剂量处理组给药与对照组比较，小鼠肾组织细胞出现明显的改变，肾脏近曲小管中度水肿，水肿改变主要集中在肾皮质部位，在大剂量持续给药情况下，对小鼠肾脏有一定的损伤。

　　（A - B） 小鼠正常卵巢组织空白对照 （左，100x,右，400x）（C - D） 小鼠 30 倍中药剂量处理后肾组织（左，100x,右，400x）（E - F） 小鼠 60 倍中药剂量处理后肾组织（左，100x,右，400x）3. 2. 4 各处理试验组的小鼠输卵管组织解剖结果对照组小鼠卵巢、输卵管、子宫组织均正常。

　　处理组 30 倍剂量给药组小鼠卵巢、输卵管、子宫组织及生殖器结构与对照组基本无差异，表明复方安胎中药在中等剂量给药下，对小鼠的卵巢、输卵管、子宫无毒性，生殖器结构未见异常。

　　60 倍高剂量处理组给药与对照组比较，20%出现输卵管上皮细胞水肿，输卵管管腔扩大，卵巢、子宫未见明显改变。在大剂量持续给药情况下，对小鼠输卵管造成损伤，但小鼠卵巢、子宫没有出现明显的组织改变。

　　（A - B） 小鼠正常卵巢组织空白对照 （左，100x,右，400x）（C - D） 小鼠 30 倍中药剂量处理后卵巢（左，100x,右，400x）（E - F） 小鼠 60 倍中药剂量处理后卵巢 （左，100x,右，400x）在给药结束观察两周后处死所有小鼠，对其肝、肾、胃和子宫等脏器进行解剖学检查，未发现所检器官有肿胀、萎缩、出血、颜色异常、粘连和硬化等异常改变，对照组与试验组未见显著差异。

　　4 讨论与结论。

　　中药毒性现代研究应在中医理论指导下，在科学界定中药毒性属性基础上，对进行急性毒性研究及长期毒性观察，对未知毒性中药着重进行毒性和安全使用条件的研究， 《本草拾遗》则分为大毒、有毒、小毒、微毒四级， 《本草纲目》沿袭《本草拾遗》分四级。肝脏药物代谢酶是决定中药复方体内过程的关键因素，复方中化学成分对药物代谢酶的抑制或诱导作用是中药复方在药动学层次上的主要机制[5],因此复方中药对肝脏的影响是主要的观察指标之一。近些年来国内外学者对中草药肾毒性报道基础上，对致肾毒性的常见中草药、动物药、矿物药及中药汤剂、中成药进行汇总[6],结合临床实践提出一些针对中药肾损伤的预防措施，规范使用可能导致肾损伤的中草药及其制剂，达到安全合理用药的目的。

　　在急性毒性实验过程中未出现小鼠死亡，无法测出此安胎中药复方的 LD50,测出最大耐受量（MTD） 为 40g/kg,约为临床用量的 25 倍，按照急性毒性实验方法[7],给药过程中高剂量组小鼠均未出现急性中毒症状，各组小鼠生存质量良好，试验组体重增加比对照组更加迅速。

　　对传统中药毒性分级，对中药行业亟待解决的中药毒性分级本质、科学内涵及风险控制等问题进行研究，在 《中国药典》（一部） 收载的中药材毒性分级标注工作[8],明确中药毒性是中药产业化、现代化和国际化的发展需求。试验结果表明，在安胎复方中药中等剂量持续给药时，对实验小鼠的肝脏、肾脏和生殖系统无明显影响。在大剂量持续给药的情况下，对肝脏、肾脏和生殖系统有一定的损伤，但未发现对小鼠卵巢和子宫有明显的影响。

　　研究说明此安胎中药复方在正常给药剂量条件下是安全的，因此属于微毒的中药复方。

　　参考文献：
　　[1][南宋]薛古愚 . 中医古籍珍稀抄本-薛氏济阴万全书[M]. 上海科学技术出版社，2004: 28 -86.
　　[2] 司徒仪，杨家林 . 妇科专病中医临床诊治[M]. 北京：人民卫生出版社，2005: 291 -328.
　　[3] 周一平 . 用 SPSS 软件计算新药的 LD50[J]. 药学进展，2003,27（5） : 314 - 316.
　　[4] 孙敬昌 . 关于中药毒性现代研究的几点设想[J]. 中医杂志，2009,50（7） : 649 -650.
　　[5] 马增春，王宇光，谭洪玲，等 . 中药与肝脏药物代谢酶之间的相互作用[J]. 世界华人消化杂志，2016,24（7） :994 - 1001.

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