天降血栓通丸对CAS疗效的动物实验分析

时间:2017-06-25

动脉粥样硬化是一种发生在含有平滑肌的大、中动脉的疾病，是导致心脑血管疾病的主要原因。其病理变化主要累及体循环系统的大、中型动脉，发病机制以内皮功能障碍、血管炎以及脂质、胆固醇、钙和细胞碎片等成分沉积于血管内膜为特征。

　　随着疾病的发展，逐渐使其管壁增厚，失去弹性而狭窄导致急性和慢性血管腔阻塞、血流异常和靶器官供氧减少。最终导致脑卒中、心肌梗塞、甚至碎死而危及患者的生命。目前他汀类降脂药物[1]

　　是其主要治疗手段，但长期服用对肝肾功能损伤较大，且经济负担较重。

　　本课题组从多年的中医临床实践中总结经验，并开展相关动物实验研究及临床病例观察，认为该病的关键病机为"气虚血瘀、痹阻清窍",以"天降血栓通丸"加减辨治CAS.脂质代谢紊乱与动脉粥样硬化关系密切，尤其是胆固醇、血脂、LDL和HDL在动脉粥样硬化形成中作用显著。有研究发现益气活血中药能改善高脂大鼠甘油三酯及胆固醇程度，减慢动脉硬化速度[2].天降血栓通丸具有益气健脾、活血化瘀之职，为进一步证实天降血栓通丸治疗CAS的疗效，开展了以下动物实验研究，试图通过对颈动脉粥样硬化模型大鼠治疗前后颈动脉内膜组织的病理形态、胆固醇及甘油三酯程度的观察，揭示其可能的作用机制。

　　1 实验材料。

　　动物健康清洁级12周龄（200±20g）雄性Wistar大鼠（天津市医药科学研究所）60只，饲养于Ⅱ级动物饲养室。药品中药药材使用颗粒剂（天津市北辰中医医院），西药使用辛伐他汀片（山东罗欣药业公司）。

　　试剂病理、包埋、染色等所需基本试剂（天津市医药科学研究所），颈动脉内膜厚度测定、血清胆固醇及甘油三酯等测定（天津市医药科学研究所）。

　　2 实验方法。

　　2.1 动物分组：将60只Wistar大鼠常规喂养7天后，随机分为4组，即空白对照组、模型对照组、西药组、中药组，每组15只大鼠。

　　2.2 模型制备：造模各组参照迟东升等方法给予高脂饲料喂养12周（高脂饲料配方：胆固醇3%,猪胆酸盐0.5%,猪油10%,基础饲料86.5%.），并于实验开始4周后给予维生素D3注射液按70万U/kg的剂量腹腔注射，分3天给完复制早期动脉粥样硬化大鼠模型。

　　2.3 药品制备：天降血栓通丸按照原方剂量换算，全方组成为党参100g、蝮蛇400g、地龙100g、黄芪140g、丹参140g、赤芍80g、川芎100g、山楂200g、水蛭40g、降香20g、石菖蒲80g组成。将中药颗粒剂倒入容器内，加热水（水温80℃~100℃）充分搅拌，调制成以含生药2.25g/ml的溶液。辛伐他汀片按照药品说明书用量，研成极细粉末。上述药物均置4℃冰箱备用。

　　2.4 药物干预：空白对照组与模型对照组于造模后第2天用生理盐水灌胃，各治疗组予相应药液灌胃，西药按10mg/d/kg;中药按照22.5g/d/kg比例进行，每日1次，共灌胃8周后将各组动物处死进行指标检测。

　　2.5 动物取材：各组大鼠处死前24小时禁食不禁水，麻醉后常规开腹迅速取出切取左颈动脉2~3cm,生理盐水冲洗干净，固定、脱水、包埋、切片备光镜下观察，以内皮细胞呈棕黄色颗粒为阳性结果。

　　2.6 指标检测2.6.1 一般状况观察：每日记录大鼠的体重、饮水变化量、皮毛、精神状态及活动情况。

　　2.6.2 颈动脉内膜观察：取胸主动脉 1 cm,甲醛固定，通过逐级脱水、浸蜡、包埋、切片及脱蜡到水，并采用 HE 染色，在光镜下观察主动脉结构及动脉粥样硬化程度。应用计算机图像分析系统测主动脉内膜厚度，每片随机取3个视野，取其平均值。

　　2.6.3 血脂测定：末次灌胃给药后，各组大鼠禁食12小时。晨起空腹，给予各组大鼠25%乌拉坦（0.5ml/100g）腹腔注射麻醉，颈动脉迅速取血2ml,加入含肝素抗凝的试管中，混匀，4℃，3 500转/分离心15分钟，取上清液，以氧化酶法测总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、化学修饰法测高密度脂蛋白（HDL-C）、低密度脂蛋白（LDL-C）含量。

　　2.7 统计学方法使用SPSS 13.0统计软件处理，实验数据为计量资料者，以均数±标准差（x-±s）表示，组与组之间比较采用成组t检验；实验数据为计数资料者，采用行×列χ2检验，P<0.05有统计学意义。

　　3 实验结果。

　　3.1 颈动脉内膜改变：光镜下空白对照组主动脉壁内膜表面光滑，结构正常，无脂质沉积改变，弹力纤维分布均匀。模型对照组主动脉内膜明显增厚，主动脉管壁呈局灶隆起，内皮下可见大量呈圆形且体积较大的泡沫细胞，胞质内大量空泡，符合动脉粥样硬化的早期改变。中药组和西药组主动脉内膜较空白对照组增厚，可见少量泡沫细胞，但较模型对照组有明显改善。

　　与空白对照组比较，**P<0.01;与模型对照组比较△P<0.05.

　　3.2 各组脂质代谢的变化： 与空白对照组比较，经高脂饲料饲养的模型对照组大鼠血清 TC,TG,LDL-C 的含量明显升高，HDL-C 的含量降低；而与模型对照组比较，中药组及西药组均能明显或部分降低大鼠血清 TC,TG,LDL-C的含量，升高 HDL-C 的含量，说明具有一定的调节脂质代谢作用但组间无显著性差异。

　　与空白对照组比较，*P<0.05;与模型对照组比较△P<0.05.

　　4 讨 论。

　　本实验通过高脂饲料喂养制造颈动脉粥样硬化大鼠模型，观察天降血栓通丸于CAS模型大鼠一般情况、颈动脉内膜厚度、血清脂质代谢等的影响。结果发现天降血栓通丸能显著改善颈动脉内膜厚度，减少泡沫细胞及脂质沉积形成，减少颈动脉粥样硬化斑块形成，改善内皮细胞的肿胀、变性， 抑制血管内膜的增厚，保血管内皮结构及功能的作用。动脉粥样硬化主要是在血管内皮细胞损伤的基础上发生的一系列炎症反应，天降血栓通丸治疗颈动脉粥样硬化其作用机理可能为通过升高血清中TC、TG、LDL-C及降低HDL-C,从而改善内皮功能 ,使血管活化或损伤程度降低。

　　中医学本无CAS,有学者将其归属为"胸痹"、"眩晕"、"心悸"、"肾痹"等范畴[3].其病机为气虚血瘀，而血液流变学改变是血瘀证发生的重要病理基础[4],随着病情的发展瘀血阻滞经脉，血行不畅，继而血不能濡养脏腑经络，必然导致新血生成障碍，久则致气血亏虚，所以，瘀血阻滞，气血亏虚为此病的病理机制。病性总属本虚标实，同时可合并痰浊、寒凝等，临证以痰浊气血血瘀多见。中医药治疗本病效果显著，有研究报道祛瘀化痰方能够明显改善大鼠胸主动脉血管及心肌病变情况[5].

　　故益气活血通络是治疗颈动脉粥样硬化的主要手段。天降血栓通丸具有益气活血，开窍通络的功效，该研究从新的科学角度探讨了脂质代谢与天降血栓通丸作用机制的相关性，不仅进一步验证了CAS的关键病机，也为寻求治疗CAS的新的药物靶点和方法提供了有利的理论依据和指导。

　　参考文献：
　　[1]刘松岩，张晓君，才华，等。不同剂量阿托伐他汀对国人颈动脉粥样硬化影响的Meta分析[J].吉林大学学报，2013,39（2）：313-317.
　　[2]杨振，洪铁，刘玉梅，等。丹蒌片对高脂血症及血管内皮损伤大鼠的保护作用[J].世界中西医结合杂志，2010,5（6）：491-493.
　　[3]胡冠英。当归补血汤治疗动脉粥样硬化的机制研究[J].陕西中医学院学报，2014,37（1）：103-105.
　　[4]时晶，田金洲，王永炎，等。血瘀证的生物学基础研究[J].中华中医杂志，2006,21（6）：363-364.
　　[5]商硕，许利平，杨鑫伟，等。祛瘀化痰方对动脉粥样硬化大鼠心血管损伤的保护作用[J].北京中医药，2012,2（31）：143 -149.

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